STABILITY STUDY AND QUANTITATIVE ANALYSIS OF THE DRUG "TINIDAZOLE" PREPARED ON A PHARMACOLOGICALLY ACTIVE BASIS

 

Anna Zamaraeva

Post-Graduate Student of Department of Chemistry, Tyumen State Medical University, Ministry of Health of Russia,

Russia, Tyumen

Natalya Bessonova

PhD in Biology, Associate Professor of Department of Chemistry, Tyumen State Medical University, Ministry of Health of Russia,

Russia, Tyumen

Tatyana Kobeleva

Doctor of Pharmacy, Professor, Head of the Department of Chemistry, Tyumen State Medical University, Ministry of Health of Russia,

Russia, Tyumen

Alik Sichko

Doctor of Pharmacy, Professor, Professor, Department of Chemistry, Tyumen State Medical University, Ministry of Health of Russia,

Russia, Tyumen

 

АННОТАЦИЯ

В настоящее время, не наблюдается значительного снижения уровня заболеваемости дерматозами различной этиологии. По данным федеральной службы государственной статистики каждый год выявляется около семи миллионов человек с данным диагнозом [5]. Поэтому разработка новых, все более эффективных препаратов для дерматопротекторной терапии является актуальной задачей фармации [7]. Нами предложена мягкая лекарственная форма, состоящая из 0,1 г тинидазола и геля «Тизоль» до 10 г. «Тинидазоль» может найти применение в дерматологии, стоматологии и гинекологии как противомикробное и противопротозойное средство. При создании новых препаратов необходимо разрабатывать нормативно-техническую документацию, позволяющую оценивать качество их приготовления [1]. Поэтому целью нашего исследования определено изучение стабильности и разработка методики количественного анализа лекарственного препарата «Тинидазоль». В результате проведенного эксперимента установлено, что для физико-химического анализа лекарственного препарата рационально использовать этанольную полосу поглощения в пределах длин волн 308-315 нм. Приготовленная лекарственная форма «Тинидазоль» стабильна при хранении один год. Чувствительность анализа тинидазола, выраженная через открываемый минимум, равна 0,664 мкг/мл при Аmin = 0,02, что подтверждает возможность использования спектрофотометрии в УФ - области спектра для количественного анализа тинидазола в мази.

ABSTRACT

Currently, there is no significant reduction in the incidence of dermatoses of various etiologies. According to the Federal state statistics service, about seven million people with this diagnosis are identified every year [5]. Therefore, the development of new, increasingly effective drugs for dermatoprotective therapy is an urgent task of pharmacy [7]. We have proposed a mild dosage form consisting of 0.1 g of tinidazole and Tizol gel up to 10 g. Tinidazole can be used in dermatology, dentistry and gynecology as an antimicrobial and Antiprotozoal agent. When creating new drugs, it is necessary to develop regulatory and technical documentation that allows evaluating the quality of their preparation [1]. Therefore, the purpose of our study is to study the stability and develop a method for quantitative analysis of the drug "Tinidazole". As a result of the experiment, it was found that for the physico-chemical analysis of the drug, it is rational to use the ethanol absorption band within the wavelength range of 308-315 nm. The prepared dosage form "Tinidazol" is stable when stored for one year. The sensitivity of the tinidazole assay, expressed in a minimum time, is equal to 0.664 micrograms/ml at Amin = 0.02, which confirms the possibility of using spectrophotometry in the UV region of the spectrum for quantitative analysis of tinidazole in the ointment.

 

Ключевые слова: тинидазол, гель «Тизоль», количественный анализ, спектрофотометрия, стабильность.

Keywords: tinidazole, Tizol gel, quantitative analysis, spectrophotometry, stability.

 

Введение. Тинидазол относится к производным 5-нитроиминазола, проявляет бактерицидное действие на анаэробные микроорганизмы и обладает противопротозойной активностью. Нами предложена лекарственная форма «Тинидазоль», содержащая 1 % тинидазола в геле «Тизоль», которая может найти перспективное применение в дерматологии, стоматологии и гинекологии, как бактерицидное и противопротозойное средство. Гель «Тизоль» представляет собой малотоксичную мазевую основу, обладающую фармакологическими свойствами. Благодаря наличию в составе титансодержащей основы, повышается проводимость тинидазола через ткани и кожу, а также достигается дополнительное противовоспалительное, анальгетическое, антисептическое и противозудное действие [6].

Цель исследования: изучение стабильности и разработка способа количественного анализа лекарственного препарата «Тинидазоль».

Материалы и методы. Объектом исследования является мягкая лекарственная форма, состоящая из 0,1 г тинидазола и геля «Тизоль» до 10 г. Для осуществления эксперимента применяли спектрофотометрию в ультрафиолетовой области, используя прибор марки СФ-2000.

Для исследования стабильности мягкой лекарственной формы «Тинидазоль» приготовили искусственную мазь с точной массой лекарственного препарата и основы (тинидазола 0,1 г, геля «Тизоль» 9,9 г). Далее рассчитывали теоретическую массу мази для приготовления 50 мл 1,0∙10-5 моль/л этанольного раствора тинидазола. Полученную смесь фильтровали, используя фильтр «белая лента», готовили раствор лекарственного препарата.

При спектрофотометрическом определении тинидазола концентрацию его находили способом градуировочного графика. Для его построения готовили исходный 0,02 % раствор лекарственного препарата на этаноле. Далее, к 0,2; 0,4; 0,6....1,2 мл полученного раствора прибавляли этанол до общего объема 10 мл и измеряли оптические плотности растворов с помощью спектрофотометра при длине волны 310 нм (l = 10 мм). По полученным данным опытов строили график зависимости оптической плотности от концентрации препарата в мкг/мл.

При количественном определении тинидазола в искусственной лекарственной форме (тинидазола 0,1 г, этанола 10,0 мл) поступали следующим образом: в мерную колбу вместимостью 25 мл вносили 1 мл полученного этанольного раствора и этанолом доводили объем жидкости в колбе до метки (Vобщ). Далее, 1 мл полученного раствора переносили в мерную колбу емкостью 25 мл, этиловым спиртом доводили объем колбы до метки и с помощью спектрофотометра измеряли по отношению к этанолу оптическую плотность смеси при длине волны 310 нм в кювете с толщиной рабочего слоя 1 см.

Количественное определение тинидазола в лекарственной форме проводили следующим образом: к точной навеске мази (около 0,10 г) прибавляли 25 мл этанола, перемешивали до получения дисперсной системы и фильтровали смесь через складчатый фильтр «синяя лента», отбрасывая первую порцию фильтрата. Далее, к 4 мл полученного раствора прибавляли этанол до общего объема 10 мл и измеряли оптическую плотность смеси при длине волны 310 нм (l = 10мм). В качестве раствора сравнения использовали этанольную вытяжку из геля «Тизоль», полученную аналогично исследованию мази [2, 3, 4].

Результаты и их обсуждение. На спектре поглощения тинидазола в этаноле (рисунок 1, кривая 1) присутствуют два максимума: первый в области длин волн 229-232 нм (ε = 3069,19), второй – при λ = 309-311 нм (ε = 8393,58). Также на кривой наблюдается один минимум поглощения при длине волны 260-262 нм (ε = 1416,55).

 

Рисунок 1. График зависимости поглощения тинидазола в этаноле (кривая 1) и в присутствии геля «Тизоль» (кривые 2 и 3) от длины волны

1 - С(преп) = 8,0∙10-5моль/л; 2 - С(преп) = 1,0∙10-4моль/л, С(тиз) = 1,0∙10-4моль/л; 3 - С(преп) = 8,0∙10-5 моль/л, С(тиз) = 1,0∙10-4моль/л; 4 - этанольная вытяжка тинидазола из мази (С = 5·10-5моль/л)

 

Для количественного физико-химического анализа лекарственного препарата рационально использовать этанольную полосу поглощения в пределах длин волн 308-315 нм, в которой не поглощают световую энергию многие растворители, кислоты и основания. Гель «Тизоль» в данной области спектра поглощает свет меньше, чем при полосе 204-210 нм. Следовательно, мазевая основа, частично перешедшая в этанольную среду, не будет оказывать существенное влияние на анализ тинидазола.

Стабильность мази тинидазола, полученную на геле «Тизоль», определяли спектрофотометрическим методом по таким показателям, как концентрация лекарственного препарата в этанольной вытяжке (моль/л), молярный коэффициент светопоглощения (ε) и массовая доля тинидазола в этанольной вытяжке (W, %). Данные показатели рассчитывали непосредственно при изготовлении мази, а также через месяц и 12 месяцев ее хранения (таблица 1).

Таблица 1.

Результаты определения показателей стабильности мази «Тинидазоль» спектрофотометрическим методом (этанольные растворы, l = 310 нм)

Показатели стабильности

Взято

Найдено

0 месяцев

1 месяц

12 месяцев

С, моль/л

W, %

e(310)

8,0∙10-5

100,0

8393,58

7,98∙10-5

99,70

8368,40

7,99∙10-5

99,90

8385,19

7,97∙10-5

99,60

8360,00

С, моль/л

W, %

e(310)

8,0∙10-5

100,0

8393,58

7,96∙10-5

99,50

8351,61

7,95∙10-5

99,40

8343,22

7,97∙10-5

99,60

8360,00

С, моль/л

W, %

e(310)

8,0∙10-5

100,0

8393,58

7,96∙10-5

99,50

8351,61

7,96∙10-5

99,50

8351,61

7,97∙10-5

99,60

8360,00

С(ср), моль/л

Wср, %

eср(310)

8,0∙10-5

100,0

8393,58

7,90∙10-5

99,57

8357,21

7,97∙10-5

99,60

8360,00

7,97∙10-5

99,60

8360,00

 

Таким образом, спектрофотометрическим методом нами установлено, что при обработке мази «Тинидазоль» в органическую фазу переходит не менее 99,40 % лекарственного препарата. Этанол является хорошим растворителем, в котором мазевая основа практически не растворима. В данной среде рационально проводить количественное определение тинидазола. Сама основа будет проводить лекарственное вещество до патологического очага, освобождать тинидазол и совместно с ним оказывать фармакологический эффект. Приготовленная лекарственная форма «Тинидазоль» стабильна при хранении 1 год.

Чувствительность анализа оценивали через открываемый минимум в мкг/мл. Для этой цели использовали угол наклона калибровочного графика. Так как оптическая плотность раствора зависит от концентрации лекарственного препарата, чувствительность метода рассчитывали по формуле:

Cmin = Amin / b,

где b – угловой коэффициент, который равен:

Во избежание субъективного характера в определении чувствительности анализа при нахождении углового коэффициента использовали не сам график, а его аналитическое выражение.

Таблица 2.

Расчет чувствительности анализа тинидазола

xi , мкг/мл

yi

xi yi

xi2

b

С, мкг/мл

4,0

0,12

0,48

16,0

0,0301

0,664

8,0

0,24

1,92

64,0

12,0

0,37

4,44

144,0

16,0

0,48

7,68

256,0

20,0

0,60

12,00

400,0

24,0

0,72

17,28

576,0

 

Цифры, приведенные в таблице 2, свидетельствуют о том, что чувствительность анализа тинидазола, выраженная через открываемый минимум, равна 0,664 мкг/мл при минимальном значении оптической плтности равном 0,02. Следовательно, спектрофотометрию в УФ - области спектра можно использовать для количественного анализа лекарственного препарата в мази.

При спектрофотометрическом определении тинидазола концентрацию его находили способом градуировочного графика (рисунок 2).

 

Рисунок 2. Градуировочный график при анализе тинидазола

 

График выражается прямой линией, проходящей через начало координат. Растворы тинидазола подчиняются основному закону светопоглощения в пределах концентраций 1,6 - 24,0 мкг/мл. Прямо пропорциональная зависимость поглощения от содержания лекарственного препарата позволяет анализировать его спектрофотометрическим методом в мягкой лекарственной форме. Для получения достоверных результатов анализа провели восемь параллельных опытов, используя 0,8 мл исходного раствора, доведенного этанолом до общего объема 10 мл. Массовую долю тинидазола в процентах рассчитывали по формуле:

Где: С(преп) – масса лекарственного препарата, найденная по градуировочному графику, мкг/мл; V(общ) – объем этанола, в котором растворена навеска тинидазола (100 мл); V1 – объем раствора, взятый для фотометрирования (10 мл); V(п) – объем пипетки (0,8 мл); а(преп) – навеска лекарственного препарата, г.

Полученные данные статистически обработали (таблица 3). Относительная ошибка анализа составляет ± 1,65 %.

Таблица 3.

Статистическая обработка результатов спектрофотометрического анализа тинидазола

А

С,

мкг/мл

Найдено (хі), W, %

 - хі

( - хі)2

Метрологические характеристики

0,480

15,95

99,69

-0,16

0,0256

 = 99,53 %

S = 1,9615

S = 0,6935

eα = 1,64

А = ± 1,65 %

∆ = 99,53 ± 1,64 %

0,485

16,11

100,69

-1,16

1,3456

0,490

16,28

101,75

-2,22

4,9284

0,490

16,28

101,75

-2,22

4,9284

0,470

15,61

97,56

1,97

3,8809

0,470

15,61

97,56

1,97

3,8809

0,480

15,95

99,69

-0,16

0,0256

0,470

15,61

97,56

1,97

3,8809

 

По полученным значениям опытов при количественном определении тинидазола в искусственной смеси (тинидазола 0,1 г, этанола 10,0 мл) рассчитывали массу препарата в лекарственной форме по формуле:

Где: С(преп) – масса тинидазола, найденная по уравнению градуировочного графика, мкг/мл; V(общ) – объем мерной колбы, в которую перенесен исследуемый раствор (25 мл); V – объем раствора, взятый на анализ (1 мл); V1 объем раствора для фотометрирования (25 мл); V(п) – объем пипетки (1 мл)

Таблица 4.

Результаты анализа тинидазола в модельной лекарственной форме способом уравнения градуировочного графика (А = 0,0301×С)

N

п/п

Оптическая плотность

Масса, мкг/мл

Найдено

Допустимые нормы

%

г

%

г

1

0,49

16,28

1,02

0,1018

± 15

0,085 - 0,115

2

0,50

16,61

1,04

0,1038

3

0,47

15,61

0,98

0,0976

4

0,46

15,28

0,96

0,0955

5

0,44

14,62

0,91

0,0914

6

0,50

16,61

1,04

0,1038

 

Масса тинидазола в модельной лекарственной форме находится в пределах 0,0914 – 0,1038 г при допустимых отклонениях 0,085 – 0,115 г (таблица 4).

По полученным значениям опытов при количественном определении тинидазола в мягкой лекарственной форме находили содержание тинидазола в пробе (мкг/мл) по уравнению градуировочного графика, а массу и массовую долю в процентах в мази рассчитывали по формулам:

Где: а(мази) – навеска мази, взятая на анализ, г; Р – масса лекарственной формы, г; V1, V2 – фактор разбавления (4 мл и 10 мл, соответственно); V(общ) – объем этанола, в котором растворена навеска мази (25 мл).

Таблица 5.

Результаты количественного определения тинидазола в мази способом уравнения градуировочного графика (А = 0,0301·С)

Взято

Найдено

Допустимые нормы

m(мази), г

m(тиз), г

А

С, мкг/мл

m, г

W, %

г

%

0,1020

0,1039

0,54

17,94

0,1099

1,10

0,085

0,115

 

± 15,0

 

0,1020

0,1039

0,52

17,28

0,1059

1,06

0,1020

0,1039

0,53

17,61

0,1079

1,08

0,1020

0,1039

0,50

16,61

0,1018

1,02

0,1017

0,1039

0,52

17,27

0,1061

1,06

0,1017

0,1039

0,51

16,94

0,1041

1,04

0,1017

0,1039

0,50

16,61

0,1021

1,02

0,1017

0,1039

0,52

17,27

0,1061

1,06

 

Содержание тинидазола в лекарственной форме (таблица 5), рассчитанное способом уравнения градуировочного графика, находится в пределах 0,1018 - 0,1099 г. Результаты не превышают допустимые отклонения, представленные в приказе МЗ РФ от 26.10 2015г №751н «Об утверждении правил изготовления и отпуска лекарственных препаратов для медицинского применения аптечными организациями, индивидуальными предпринимателями, имеющими лицензию на фармацевтическую деятельность» [8].

Заключение. Изучены оптимальные условия проведения спектрофотометрического анализа. Установлено, что для количественного определения тинидазола следует использовать длину волны 310 нм. Проведены исследования по анализу эталонной смеси и разработан способ, позволяющий количественно определять лекарственный препарат с относительной ошибкой ±1,65 %. Предложена методика спектрофотометрического анализа тинидазола в мягкой лекарственной форме на титансодержащей основе с ошибкой, не превышающей нормативные отклонения. Разработанный способ анализа тинидазола в мази «Тинидазоль» может быть рекомендован для включения в нормативную документацию по установлению качества ее изготовления. Исследования показали, что лекарственная форма «Тинидазоль» стабильна при хранении один год.

 

Список литературы:

  1. Аюпова Г.В. Современные аспекты разработки и совершенствования состава и технологии лекарственных форм // Медицинский вестник Башкортостана. 2016; 11(5):87-90.
  2. Евстафьева Т.Г., Бачева Н.Н., Бессонова Н.С., Кобелева Т.А., Сичко А.И. Применение спектрофотометрического анализа для установления осмотической и транскутанной активности новых лекарственных форм «Метамиозоль» и «Фенилбутазоль» // Медицинская наука и образование Урала. 2018; 19(3):56-62.
  3. Евстафьева Т.Г., Бессонова Н.С., Кобелева Т.А., Сичко А.И. Применение спектрофотометрии в анализе нового лекарственного препарата «Метатетразоль» // Здоровье и образование в XXI веке. 2018; 20(12):55-59.
  4. Замараева А.И., Бессонова Н.С., Кобелева Т.А., Сичко А.И. Исследования в области анализа мягкой лекарственной формы «Метротербиназоль», используемой в медицинской практике // Медицинская наука и образование Урала. 2020; 3(103):32-36.
  5. Здравоохранение в России. 2019: Стат.сб./Росстат. - М., 2019. – 170 с.
  6. Махотина, М.В., Петров А.Ю. Сравнительный анализ технологий экстемпорального изготовления мазей на основе Тизоля // Фундаментальная наука и технологии – перспективные разработки: материалы XIV-й международной научно-практической конференции. – North Charleston, USA, 2018; 2:96-98.
  7. Сабиржан Р.Р., Егорова С.Н. Аптечное изготовление лекарственных форм для лечебно-профилактических учреждений: изучение современной номенклатуры // Научные ведомости Белгородского государственного университета. 2012; 18/2(10):31-35.
  8. Приказ МЗ РФ от 26.10.2015г. № 751н «Об утверждении правил изготовления и отпуска лекарственных препаратов для медицинского применения аптечными организациями, индивидуальными предпринимателями, имеющими лицензию на фармацевтическую деятельность»